常用的基改酵母培養基有哪些?

畢赤酵母(Pichia pastoris)和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是兩種最常用來大量表達轉殖基因的酵母菌,不過,培養這兩種酵母菌的培養基琳瑯滿目,而且英文簡稱又都很像,常把人搞得一頭霧水。底下就分門別類的一一跟您介紹。

  1. YNB(YNB w/o aa)

基改酵母培養基最大的核心培養基是YNB,更準確的說是YNB w/o aa(YNB without amino acids)。這是一款全人造的培養基,它的各個成分、含量都有明確列表,都是固定不變。此款培養基是公認最適合基改酵母菌生長的培養基,不過,它不含任何胺基酸和部份嘌呤、嘧啶,可供研究人員操作使用。YNB加上銨鹽之後,稱之為YNB w/ ammonium sulfate w/o aa。再加上葡萄糖之後,稱為DOB或DOBA(含agar),也就是dropout base。

2. SC和CSM

SC和CSM是最常用的兩種胺基補充粉,其中 SC含有全部的胺基酸, CSM則只含有關鍵胺基酸。 所謂關鍵胺基酸就是它可以生合成其他胺基酸,所以有全部的關鍵胺基酸,就等於有全部了。這兩種胺基酸補充粉會加入DOB或DOBA中一起使用。為了篩選特定缺陷的酵母菌,SC和CSM會有單缺陷、雙重缺陷……的形式,也就是少了單一或是複數以上的胺基酸。DOB或DOBA加上 CSM稱為SD或SDA, 加上 SC稱為 SC complete或SC complete agar。

3. MGY

MGY為minimal glycerol mediume,主要用於基改酵母誘導前擴菌。因為其中含有甘油,會抑制AOX1表達,可以讓酵母菌更專注於生長,而達到高密度培養的目的。MGY 有許多變型,例如加了腺嘌呤或組胺酸,主要是在擴菌之外,用來輔助下一階段甲醇誘導時,有更多的蛋白表現。值得一提的是,MGY成分中YNB的用量為篩選培養基中的兩倍,為的是讓菌長得更好、更密。而1/2MGY中YNB的含量則和篩選培養基的一樣。

4. BMGY/BMMY

BMGY/BMMY由BMG(Minimal Glycerol Medium) 變化而來。BMG相對於 MGY多了磷酸鹽的緩衝能力, 都是用於誘導前的擴菌。BMGY/BMMY則是 BMG多了酵母萃取物,另外BMMY多添加甲醇。多了磷酸鹽的緩衝能力,能夠控制誘導時的環境酸鹼值,讓誘導出的蛋白質,特別是分泌出來的蛋白質有更好的活性和回收率。

相關產品連結: YNB w/ ammonium sulfate w/o aaSCCSM、MGY、BMGY、BMMY

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